广州东盛生物科技有限公司
Guangzhou Dongsheng Biotech Co.,Ltd..
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HS Taq DNA聚合酶
PCR/RT-PCR >> PCR试剂

品牌: 东盛
产地: 广州
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包装与价格:
订货号 纯度规格 包装 价格(元)
P1081 250 U 80
P1082 500 U 150
P1083 1,000 U 270
P1084 18,000 U 4000
品牌: 东盛
产地: 广州
产品介绍

产品组分

P1071
HSTMTaq DNA聚合酶 5 U/μl 50 μl
10×HSTM  PCR缓冲液(Mg2+Plus) 1.4 ml
6×上样缓冲液 1 ml
P1072
HSTMTaq DNA聚合酶 5 U/μl 100 μl
10×HSTM  PCR缓冲液(Mg2+Plus) 1.4 ml
6×上样缓冲液 1 ml
P1073
HSTMTaq DNA聚合酶 5 U/μl 200 μl
10×HSTM  PCR缓冲液(Mg2+Plus) 1.4 ml×2
6×上样缓冲液 1 ml
P1074
HSTMTaq DNA聚合酶 5 U/μl 100 μl×18
6×上样缓冲液 1 ml

注:1、HSTMTaq DNA聚合酶分为2.5 U/μl与5 U/μl两种包装,可自由选择,如没特别说明提供5 U/μl的包装。
2、10×PCR 缓冲液分为Mg2+Plus与Mg2+Free两种包装,可方便选择。如没特别说明提供Mg2+Plus缓冲液。Mg2+Free的 10×PCR 缓冲液提供25 mM MgCl2
3、电泳时,请按每5 μlPCR反应液中加入1μl的比例添加6×上样缓冲液  混合后进行电泳。

保存条件
-20℃保存2年。多次冻融不影响生物学活性。

产品说明
HSTMTaq DNA聚合酶(High Specificity Taq DNA polymerase)是针对普通 Taq DNA聚合酶灵敏度高,易产生非特异性条带的情况,专门研制的高特异性嗜热DNA聚合酶产品。本产品的反应缓冲液的离子种类和浓度都经过改良,使得引物与模板的特异性结合力显著增强,从而提高引物与模板结合的严谨性,减少非特异性扩增。实验数据证明。 HSTMTaqDNA聚合酶能显著提高PCR扩增的特异性,降低背景,又能对长片段有较高的扩增效率。

产品特点
热稳定性好:95℃下半衰期超过40 min。
PCR产物具有3'-dA,可直接用于T/A克隆。
扩增特异性高。

产品用途
常规PCR扩增
DNA标记
DNA测序
制备TA克隆用PCR产物

活性定义
一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,扩增活性无明显改变。

10×PCR缓冲液
500 mM KCl
100 mM Tris-Cl
15 mM MgCl2
1% Triton-100

酶贮存液
20mM Tris-HCl
1mM DTT
0.1mM EDTA
100mM KCl
50 % Glycerol
1% Triton-100

应用举例
注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。

以λDNA为模板,扩增1kb片段。

λ DNA(2.5 ng/μl) 1 μl
引物1 (10 μM) 2 μl
引物2 (10 μM) 2 μl
10×PCR 缓冲液 5 μl
dNTP混合物(2.5 mM) 4 μl
HSTM Taq(5 U/μl) 0.25 μl
超纯水 补足至50 μl


PCR反应条件

95℃ 3 min
95℃ 30 sec
55~68℃ 30 sec  30 Cycles
72℃ 1 min
72℃ 10 min


注意事项
1、HSTMTaq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通常会加上1个多余的腺嘌呤。
2、碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。HSTMTaq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5
3、建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。
4、模板DNA推荐用量(50 μl 标准PCR体系)

人类基因组DNA 0.1 μg ---1 μg
λDNA 0.5 ng---5 ng
质粒DNA 0.1 ng-10 ng
大肠杆菌DNA 10 ng-100 ng

5、如进行PCR扩增后,除目的条带外,还伴随其他杂带,建议适当减少体系中的Taq酶用量,以增加PCR扩增反应的特异性。

问:如何利用HSTMTaq DNA聚合酶进行加A反应?
答:由高保真DNA 聚合酶(如Pfu)产生的PCR 扩增片段的纯化产物1-7μl;
加入1μl HSTMTaq DNA 聚合酶10×反应缓冲液(含MgCl2);
加入dATP 至终浓度0.2 mM;
加入5 U的HSTMTaq DNA 聚合酶;
加超纯水至终反应体积为10μl;
70℃孵育15-30 分钟;
进行TA克隆。

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联系人:销售部   电话:020-87791356 87648545   传真号码:020-87791381
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